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交流分享 || 微生物檢驗常見問題問答集錦(一)

放大字體  縮小字體 發布日期:2021-07-23  來源:食品微生物檢測公眾號  瀏覽次數:187
核心提示:前言技術交流,知識分享應廣大粉絲的需求,小編將陸續推出《微生物檢驗問答集錦》系列。本系列所列出的問題均是微生物檢驗過程中
 
前言
技術交流,知識分享

 

應廣大粉絲的需求,小編將陸續推出《微生物檢驗問答集錦》系列。本系列所列出的問題均是微生物檢驗過程中提問頻次較高的問題,我們咨詢專家老師后匯編,希望可以幫助微生物檢驗從業人員對檢驗過程中遇到的問題有新的理解。大家對感興趣的、比較關注的問題,也可以后臺留言,我們一起交流探討!

 

問、滅菌鍋化學檢驗和生物檢驗是每次實驗都需要做嗎?還是定期檢驗一下滅菌鍋的性能呢?

 答化學法是每次都要做的,生物法可以定期做,根據滅菌鍋的使用頻率,每周、每半月或每月做一次即可。

 

問:沙氏葡萄糖瓊脂培養基(SDA)上會不會生長細菌?

 答SDA不是選擇性培養基,而是一種廣譜的增菌培養基,pH范圍5.4-5.8,某些細菌是可以在SDA上生長的,霉菌和酵母菌總數計數時SDA上生長的菌均應計入霉菌和酵母菌總數;或者可以經過評估選擇含有抗生素(如氯霉素)的SDA或者玫瑰紅鈉瓊脂培養基進行霉菌和酵母菌總數計數。

 

 

問:瓊脂培養基為什么需要倒置培養?

 答在進行微生物培養時,若正置培養,瓊脂培養基中的水分易蒸發使平板干裂,不利于微生物的生長;同時水蒸汽會在平皿蓋上形成冷凝水,若回落在培養基表面,會使菌落蔓延生長,無法計數,若冷凝水太多會使培養基與平皿分離,容易滑動倒置培養可減少培養基表面的空氣流動,減慢培養基中水分蒸發的速度,充分維持彈性,有利于菌株的生長和繁殖,防止空氣中雜菌對培養基及培養物造成污染;也會由于重力作用在一定程度上使營養物質沉積到培養基表面,有利于微生物利用營養物質;倒置的平板方便拿取,避免環境中雜菌的污染。

需要注意的是,《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗霉菌和酵母計數》(GB4789.15-2016)是要求正置培養,而非倒置,以防霉菌孢子形成次生菌落,影響計數結果。

 

問:食品企業的環境檢測應該依據那個標準?

答:GB/T16294-2010《醫藥工業潔凈室(區)懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法》都有規定,可以做為參考。

 

 

問:請問高壓滅菌鍋需要操作人員有壓力容器操作證嗎?有些人說屬于《特種設備安全監察條例》需要操作證?

答:CNAS-CL 01-A001: 2018的 6.2.2.2條款里有說講到,如實驗室使用的高壓蒸汽滅菌器不屬于簡單壓力容器(定義參見TSG R0003 -2007《簡單壓力容器安全技術監察規程》)時,操作人員需持有特種作業人員證。

 

問:

答:開瓶后的培養基,如果長時間不使用,還在效期內,建議開瓶后間隔1年進行復驗。如果出現結塊,則不能使用。同理,如果同一批次一次購買量較多,一年內未使用完,也建議進行復檢。

 

問:控制菌檢查法中用到的培養基,在做培養基適用性的時候,其中有“指示特性”的表述,那么“指示特性”是指的什么意思?

答:培養基指示特性包括菌落大小、形態特征、指示劑反應情況(菌落顏色變化)等。例如大腸埃希氏菌在麥康凱瓊脂培養基上桃紅色菌落有沉淀環、乙型副傷寒沙門菌在XLD有黑心等。

 

 

問:什么是不可接受微生物?

答:不可接受微生物通常是指那些已知有明顯致病性的,存在足夠的數量,通過產品的給藥途徑可能導致患者不可接受風險的微生物。如何確定一種微生物是不可接受的,需要進行風險分析,包括微生物負載量、微生物特性、產品特性、給藥途徑、對患者潛在影響等。

 

 

問: 培養基滅菌沒有按照廠家提供的滅菌參數進行,是否可行?

答:可以。廠家產品說明書提供的滅菌參數可作為參考使用,使用單位也可以根據自己實驗室的實際情況,在相關法規要求內,使用自己驗證過的滅菌參數來執行。

【法規來源:中國藥典2020版9203藥品微生物實驗室質量管理指導原則   ……培養基滅菌應按照生產商提供或使用者驗證的參數進行……】

 

問:革蘭氏染色有哪些注意事項?

答:(1)最好挑選18-24h的菌落進行革蘭氏染色,培養時間過久的的革蘭氏陽性細菌可能會被染成紅色而造成假陰性。

(2)挑取適量的菌,不宜過多,均勻涂開。

(3乙醇脫色是革蘭氏染色是否成功的關鍵,15-30s為宜,脫色不夠可能會造成假陽性,脫色過度可能會造成假陰性。

 

 

 

問:如何根據實驗需要制備斜面?

答:根據實驗需求,擺放斜面一般有三種形式:

(1)長斜面:斜面底部剛覆蓋試管底部,上部距管口2.5-3cm左右;例如TSA傳代斜面。

(2)高層斜面:斜面與底層高度約為2:3,即底部高約3cm,斜面長度約2cm;如三糖鐵高層斜面。

(3)普通斜面:斜面底部距試管底部約1cm,上部距管口約2.5-3cm。

 

 

問:三糖鐵培養基顏色變化原理是什么? 

答:該培養基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例為10:10:1,只能利用葡萄糖的細菌,分解葡萄糖產酸可使斜面先變黃,但因量少,生成的少量酸接觸空氣而氧化,加之細菌利用培養基中含氮物質,生成堿性產物,故使斜面后來又變紅,底部由于是在厭氧狀態下,酸類不被氧化,所以仍保持黃色。而發酵乳糖的細菌則產生大量的酸,使整個培養基呈現黃色。如菌種接至培養基培養后產生黑色沉淀,是因為某些細菌能分解含硫氨基酸,生成硫化氫,硫化氫和培養基中的鐵鹽反應,生成黑色的硫化亞鐵沉淀。

 

問:如果三糖鐵上斜面紅色、底層黃色,中間有黑色且產氣,能否判定為沙門菌?

答:不能。某些非沙門菌也能在三糖鐵上呈現和沙門菌一樣的顏色變化,例如奇異變形桿菌。如三糖鐵上有上述顏色變化,需要進一步的進行適宜的鑒定試驗,確證是否為沙門菌。

如果采用傳統的生化鑒定,可參考GB 4789.4-2016中沙門氏菌檢驗的方法。

 

來源:網友提問,小編搜集整理

編輯:songjiajie2010

 
關鍵詞: 問答 檢驗
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