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交流分享II微生物檢驗常見問題問答集錦(二)

放大字體  縮小字體 發布日期:2021-07-23  瀏覽次數:180
核心提示:技術交流 知識分享應廣大粉絲的需求,小編將陸續推出《微生物檢驗問答集錦》系列。本系列所列出的問題均是微生物檢驗過程中提問頻
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應廣大粉絲的需求,小編將陸續推出《微生物檢驗問答集錦》系列。本系列所列出的問題均是微生物檢驗過程中提問頻次較高的問題,我們咨詢專家老師后匯編,希望可以幫助微生物檢驗從業人員對檢驗過程中遇到的問題有新的理解。大家對感興趣的、比較關注的問題,也可以后臺留言,我們一起交流探討!

 


前期回顧

交流分享 || 微生物檢驗常見問題問答集錦(一)



 

- 問答 -
 GB 4789系列什么情況下應作陽性對照,假如檢測50批樣品致病菌都是陰性結果,需要人工污染樣品做陽性對照來做質控嗎?

答:GB 4789.1里規定要定期進行,沒有明確說什么時候進行。自己實驗室需要制定sop進行規定,比如我們實驗室總是檢出某個致病菌的陽性結果,就規定一個月的時間來進行陽性對照。保證實驗室人員具有可以持續進行陽性檢出的能力的。最新的RB/T 038-2020 食品微生物檢測結果質量監控指南文件里規定:對于日常質量監控,應執行檢測方法的規定,否則建議每批或每組樣品每20個樣品1次的頻次進行;質控不一定需要人工污染樣品來做,可以用標準菌株來做陽性和陰性對照。

 

 


 

- 問答 -
商品化的即用培養基(比如血平板平皿),有供應方的驗收報告和CMA報告,購入后實驗室是否還需要做驗收嗎?商品化基礎培養基中需要添加的配套添加劑是否需要進行驗收嗎?如何驗收呢?

答:目前的標準需要做,配套添加劑不需要單獨驗收。

 

 


 

- 問答 -
關于培養基性能測試,我們公司也有文件要求,我們平時做培養基性能測試除了參考GB4789.28外,可不可以也參考我們的文件做驗收?

GB4789.28是一個最低的標準,一定要達到。比如EC肉湯只寫了大腸埃希氏菌和糞腸球菌這兩的菌株,必須要達到,如果企業自己的驗收標準(里包含了國家標準里的菌株)高于國家標準,那就更好。

 


 

- 問答 -
在瓊脂培養基制備過程中,發現滅菌后的培養基制成的平板部分偏軟甚至有不凝固的現象,是什么原因?

答:主要是瓊脂分布不均導致的。建議瓊脂類培養基滅菌前加熱溶解均勻(如果是大體積配制進行分裝滅菌的培養基,建議煮沸溶解,攪拌分裝);滅菌后,使用前,關注培養基的透光性是否均一,如果不均一,輕輕搖晃使其均勻,再傾注平皿使用。

 



 

- 問答 -
平板在培養箱中培養后,平板干裂,縮水是什么原因?如何避免?

 

平皿干裂縮水,與瓊脂的保水性、傾注培養基的量、平皿的透氣性、培養箱條件等因素均有關系。

a.瓊脂:不同的瓊脂在保水性方面略有差異,保水性差的瓊脂可能會出現嚴重縮水或者干裂。

b.培養基的量:傾注的培養基越少,平板越薄越容易干裂。按照GB4789要求,傾注融化的培養基到平皿中,使之在平皿中形成厚度至少為3 mm(直徑90 mm的平皿,通常要加入18 mL~20 mL瓊脂培養基)。如果平板需儲存,或者培養時間超過48 h或培養溫度高于40 ℃,則需要傾注更多的培養基。

c.平皿的透氣性:平板的密封性越好,保存和培養過程中培養基失水越少。雖然增加平板的密封性可以減少水份流失,但并非密封性越高越好,一些需氧型微生物(如銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌等),在密閉環境中生長較差,需要良好的透氣性才能較好的生長。

d. 培養條件:培養箱是影響平皿干裂問題的關鍵因素之一。大型的培養箱為了保證內部溫度均一,通常帶有較強的鼓風系統,內部有較強的空氣流動。而氣流越強,則越容易導致平皿失水。而對于一些沒有鼓風系統的小型培養箱,則很少會出現平皿干裂現象。在培養箱內擺放平皿時,應盡量避開風口氣流大的位置,同時遠離培養箱內部發熱板。

綜上所述,在遇到平板干裂縮水問題時,可通過增加平板培養基厚度、培養箱內增加擋板降低氣流或避開風口、選擇合適透氣性的平皿、選擇適宜瓊脂的的培養基等進行綜合的考慮分析,制定對應的方案和措施。

 


 

- 問答 -
滅菌后的瓊脂培養基若未用完,可以下次再重新融化繼續使用嗎?

答:《GB4789.28 -2013培養基的試劑和質量要求》標準中指出,含有活性化學物質或不穩定性成分的固體培養基也應即配即用,不可二次融化;因此對于一些已添加抗生素、卵黃、血清等不穩定成分的培養基,不可以再次融化使用。而對于一般的培養基(未開封啟用),可使用沸水浴或采用有相同效果的方法使培養基融化,再次融化后未用完的培養基則不能重新凝固留待下次使用。

 

 


 

- 問答 -
標準菌株存活性怎么進行?

答:標準菌株存活性就是其的復活過程,我們購買的標準菌株一般是凍干粉或者凍干管,然后我們要對其進行復活培養,這個過程是必須的,否則我們沒有辦法使用。針對其存活性的驗證,所有的標準法規中都是其存活性的判斷,一個定性的判斷。復活的過程對其進行打管,按照標準要求進行培養,如果接種到液體培養,有肉眼可見的渾濁或者進一步鏡檢時有目標微生物生長;如果接種到固體培養上,有肉眼可見的菌落,這些都叫存活性合格。

 


 

- 問答 -

實驗室多久做一次沉降菌檢測,哪個標準有規定?


答:每兩周要做一次沉降菌檢測包括操作臺和房間的,方法可以參照GB/T 16294-2010,GB/T 27405-2008《實驗室質量控制規范食品微生物檢測 食品微生物檢測》附錄中有規定。

 

 


 

- 問答 -

實驗室紫外燈怎么清潔?使用多久需要換新的紫外燈?還是說只要能用就不需要更換?


答:紫外線殺菌燈可以用紗布沾上75%酒精擦拭表面。紫外燈都有使用壽命,對于潔凈室、生物安全柜等最好能夠記錄紫外燈的使用時間,到時間后必須更換。再就是根據定期的沉降菌監測情況更換紫外燈。

 

 

- 問答 -

滅菌后的瓊脂培養基,是否可以在恒溫箱或者恒溫水浴鍋過夜或更長時間存放?對培養基性能會有影響嗎?


答:《GB4789.28 -2013培養基的試劑和質量要求》標準中指出,融化后的培養基放入47~50℃的恒溫水浴鍋中冷卻保溫(可根據實際培養基凝固溫度適當提高水浴鍋溫度),直至使用,培養基達到47℃~50℃的時間與培養基的品種、體積、數量有關。融化后的培養基應盡快使用,放置時間一般不應超過4 h。


長時間的保溫可能會造成培養基的營養成分流失,靈敏度下降,培養效果變差,瓊脂的凝膠強度降低等情況,保溫過夜或更長時間這種操作方法不是很規范。一般建議在滿足試驗安排的情況下,恒溫存放的時間越短越好。

編輯:songjiajie2010

 
關鍵詞: 問答 檢驗
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